Revista de técnicas analíticas y bioanalíticas

Abstracto

Un método de tarjeta para la evaluación del hematocrito en muestras de sangre seca que permite la corrección del volumen de la muestra

John H Miller IV, Philip A Poston, Sarah C Rutan y Thomas Karnes H

Una de las mayores preocupaciones con el análisis cuantitativo de las muestras de sangre seca (DBS) es la incertidumbre relacionada con el volumen de la muestra de una punción predefinida. La sangre con un hematocrito alto no se difundirá tan lejos como la sangre con un hematocrito más bajo cuando se aplica sobre papel de filtro, lo que da como resultado diferencias en el volumen de la muestra por unidad de área. La cuantificación del hematocrito de la sangre permitiría la corrección del volumen de la muestra, mejorando la cuantificación en los análisis de DBS. Por lo tanto, hemos desarrollado un enfoque novedoso que utiliza la reflectancia para medir el hematocrito que permitirá la corrección del volumen de la muestra. Las muestras de sangre seca preparadas a varios niveles de hematocrito, del 25 % al 75 %, se analizaron mediante reflectancia UV-visible de 210 nm a 1000 nm utilizando una sonda de fibra óptica de reflectancia Ocean Optics. Se encontró una correlación lineal entre el porcentaje de reflectancia a 980 nm y el hematocrito, con un coeficiente de correlación (r) de 0,9933. El análisis cuantitativo del volumen de la muestra se realizó fortificando las muestras con concentraciones conocidas de acilcarnitinas (carnitina libre, C2, C3, C4, C5, C6, C8, C10, C12, C14, C16 y C18). El análisis se llevó a cabo mediante LC/MS/MS en un espectrómetro de masas de triple cuadrupolo Premier de Waters. El hematocrito y el volumen de la muestra mostraron una relación lineal con un coeficiente de correlación (r) de 0,9929. Validamos nuestro modelo utilizando muestras de donantes en varios niveles de hematocrito analizando primero las muestras por reflectancia NIR para determinar el hematocrito y luego corrigiendo el volumen de la muestra. Nuestros resultados mostraron una cuantificación mejorada de varias muestras de donantes con precisiones entre el 81% y el 115% en comparación con no corregir el volumen de la muestra, que mostró precisiones del 67% al 136%. Este es el primer enfoque en tarjeta utilizado para determinar el hematocrito de la muestra que permite una cuantificación mejorada corrigiendo el volumen de la muestra. Además, el formato de reflectancia utilizado permite realizar correcciones de volumen directas y automatizables en la tarjeta, sin necesidad de realizar procedimientos fuera de línea para analizar sangre completa.