Revista de técnicas analíticas y bioanalíticas

Abstracto

Los cambios en la matriz mejoran notablemente la resolución y la identificación precisa de patógenos humanos mediante espectrometría de masas MALDI-TOF

Renata A. Culak, Min Fang, Shurene Bishop Simon, Itaru Dekio, Lakshani K. Rajakaruna y Haroun N. Shah

Se investigaron los perfiles espectrales de masa de tres patógenos Gram positivos importantes/emergentes pertenecientes a los géneros Clostridium, Listeria y Propionibacterium utilizando cuatro espectrómetros de masa MALDI-TOF (desorción/ionización láser asistida por matriz - tiempo de vuelo) de Waters, Shimadzu, Bruker y Ciphergen Biosystems. Estos instrumentos se han utilizado ampliamente para desarrollar una plataforma de diagnóstico para la preparación de alto rendimiento, bajo costo y casi sin muestra para la identificación microbiana. Los resultados demuestran el marcado efecto de la calidad espectral obtenida al alterar la matriz y el valor agregado de los procedimientos de extracción preparativa simples. Si bien los datos espectrales microbianos generalmente se recopilan en el rango de masa de 2 a 20 kDa para las firmas de diagnóstico, la mayoría de los iones de masa significativa son <10 kDa. El cambio del uso tradicional de CMBT (5-cloro-2-mercaptobenzotiazol) a DHB (ácido 2-(2, 5-dihidroxibenzoico) permitió la identificación exitosa de C. difficile, mientras que la sustitución de CHCA (ácido alfa-ciano-4-hidroxicinámico) por DHB (ácido 2,5-dihidroxibenzoico) mejoró la identificación de especies de Listeria . Por el contrario, el uso de SELDI-TOF-MS (desorción/ionización láser de superficie mejorada, tiempo de vuelo, espectrometría de masas), que emplea precaptura por afinidad de clases específicas de moléculas y analizadas utilizando ácido sinapínico, mostró una extensión de cinco veces el rango de masas de analitos, extendiendo el potencial para el descubrimiento de biomarcadores y la tipificación de cepas de P. acnes con mayor resolución.