Biología celular y molecular

Abstracto

Claudin6 suprime la migración y la invasión mediante el bloqueo de la vía Smads/Snail/MMP2/9 en las líneas celulares MCF-7 y SKBR-3

Ting Liu, Libo Jiang, Qingyang Bai, Shuqin Wu, Xiuwen Yu, Tian Wu, Junping Wang, Xiaojie Zhang, Hongmei Li, Kun Zhao, Liping Wang

Antecedentes: Hemos informado previamente que SB431542 mediado por CLDN6 suprime la EMT, la migración y la invasión en células de cáncer de mama, pero los mecanismos necesitan ser estudiados más a fondo. Nuestros experimentos previos verificaron que SB431542, un inhibidor de la vía de señalización de SMAD, inhibe la invasión, la migración y la EMT, y regula negativamente la expresión de Snail, MMP2 y MMP9 en células de cáncer de mama. La eliminación de CLDN6 revirtió los efectos de SB431542. Para estudiar más a fondo los mecanismos responsables de este efecto, se llevaron a cabo los siguientes experimentos.

Métodos: 1- CLDN6 fue inactivado por shRNA en las líneas celulares MCF-7 y SKBR-3, que habían sido pretratadas con SB431542. Las células se incubaron con antagonistas selectivos de MMP2/9 Inhibidor I de MMP2/9 de MMP-2/MMP-9. 2- Snail fue inactivado por shRNA en las líneas celulares MCF-7 y SKBR-3. Los niveles de MMP2 y MMP9 se examinaron mediante RT-PCR y Western blot. La expresión de E-cadherina y N-cadherina se analizó por Western blot y microscopía de inmunofluorescencia. La expresión de vimentina se detectó por Western blot. La migración y la invasión se analizaron por ensayo de cicatrización de heridas y ensayo de invasión de Matrigel.

Resultados: El inhibidor I de MMP2/9 revirtió los efectos de la inhibición de CLDN6 en la regulación negativa de la E-cadherina, la regulación positiva de la N-cadherina y la vimentina, y la facilitación de la migración y la invasión. En las células MCF-7-shSnail y SKBR-3-shSnail, se inhibieron la migración y la invasión, se aumentó la regulación de la E-cadherina y se redujo la regulación de MMP2, MMP9, la N-cadherina y la vimentina.

Conclusiones: El experimento demuestra que Claudín6 suprime la transición, migración e invasión epitelial-mesenquimal mediante el bloqueo de la vía SMADs/Snail/MMP2/9 en las líneas celulares MCF-7 y SKBR-3.