Biología celular y molecular

Abstracto

Construcción de un biosensor de glucosa utilizando el sistema reportero fbp1–GFP en la levadura de fisión Schizosaccharomyces pombe

Toshiya Osada, Kanako Sasai, Sho Hidaka

La levadura de fisión (Schizosaccharomyces pombe) se utiliza como plataforma para analizar la actividad de los receptores acoplados a proteína G (GPCR) heterólogos. Este tipo de levadura tiene dos sistemas GPCR: uno para detectar feromonas y otro para detectar glucosa. Anteriormente informamos sobre un sistema reportero de proteína fluorescente verde (GFP) en levadura de fisión que evaluaba las concentraciones de ligando midiendo la actividad de feromonas endógenas. En este artículo, describimos el uso del sistema reportero GFP como un ensayo de receptor de glucosa. Modificamos la levadura para expresar plásmidos reporteros en los que el promotor fbp1 se fusionó con GFP. La expresión de Fbp1 es inhibida por la glucosa, por lo que las células transformadas expresan altos niveles de GFP en ausencia de glucosa. Cuando las células de levadura transformadas se cultivaron en concentraciones variables de glucosa, el nivel de expresión de GFP dependía de la concentración de ligando (glucosa). Este método permitió medir 10 µM de glucosa y podría utilizarse como biosensor de glucosa.