Revista de técnicas analíticas y bioanalíticas

Abstracto

Determinación de tacrolimus en sangre total de rata mediante cromatografía líquida/espectrometría de masas de triple cuadrupolo

AR Suresh Babu, B. Thippeswamy y AB Vinod

Se desarrolló un método simple, sensible y rápido para la cuantificación de tacrolimus en sangre completa de rata utilizando LC/MS de triple cuadrupolo. Se extrajo una alícuota de 0,1 mL de muestra de sangre completa con metil éter de t-butilo utilizando un vórtex Heidolph. La separación cromatográfica se realizó utilizando una columna de HPLC de gradiente rápido RP 18e de cromolith (2 mm X 50 mm de diámetro interior) con una fase móvil de 90 % de metanol y 10 % de tampón de acetato de amonio 2 mM seguido de detección MS/MS. El analito se cuantificó en modo de ionización negativa. Se realizó un monitoreo de reacción múltiple (MRM) utilizando la transición m/z 802,4→560,2 y m/z 808,4→548,6 para cuantificar tacrolimus con IS (pimecrolimus), respectivamente. El método tuvo un tiempo total de ejecución cromatográfica de 2,5 min; y curvas de calibración lineal en el rango de concentración de 20,931 -1000,703 ng/mL. El límite inferior de cuantificación (LLOQ) fue de 20,931 ng/mL. El uso de citrato de sodio (3,85 %) como anticoagulante en sangre completa de rata y las muestras fueron estables durante al menos el tiempo requerido para analizar la cantidad de muestras que se podían colocar en el muestreador automático que mantiene la temperatura de 10 °C. La precisión y exactitud entre lotes y dentro de cada lote del método se determinaron utilizando 6 muestras de control de calidad. El %CV más alto fue de 478,908 ng/mL (8,01 % dentro de la serie y 3,07 entre series), con otros %CV <5 %. La recuperación varió del 23,92 % para tacrolimus en el rango de 50,285 a 798,179 ng/mL y fue del 18,52 % para pimecrolimus respectivamente. El método validado se aplicó con éxito a la cuantificación de la concentración de tacrolimus en sangre completa de rata.