Revista de técnicas analíticas y bioanalíticas

Abstracto

Prueba de afinidad Dot-ELISA: un método sencillo y de bajo coste para estimar la actividad de unión de los anticuerpos monoclonales

Svobodova Z, Jankovicova B, Horak D y Bilkova Z

Seleccionar el anticuerpo  monoclonal (mAb) “correcto” para una aplicación basada en inmunoafinidad puede ser complicado, ya que muchos productores de mAb ofrecen una amplia gama de clones de mAb contra estructuras moleculares de interés. Dado que existen diferencias significativas en la calidad de los clones de mAb, y particularmente en su actividad de unión, se desarrolló un método fácil para la comparación rápida y de bajo costo de varios clones  de mAb . La prueba de afinidad dot-ELISA es una técnica simple, versátil y sin demanda instrumental, ya que no requiere equipo costoso (como un lector ELISA o un sistema de imágenes de quimioluminiscencia/fluorescencia) y se puede realizar en cualquier laboratorio bioquímico. Este método se basa en una técnica dot-ELISA descrita previamente que se mejora con un paso caotrópico que utiliza diferentes concentraciones de tiocianato de amonio en el rango de 0-2 M. En este trabajo, la prueba de afinidad dot-ELISA se optimizó en el péptido Aβ como antígeno  y mAb anti-Aβ. Luego se aplicó dicho protocolo a un panel de ocho mAb anti-EpCAM (molécula de adhesión de células epiteliales) que se utilizarían posteriormente para la preparación de un inmunoabsorbente magnético para capturar células tumorales circulantes (CTC).