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La N-butil-N-(4-hidroxibutil) nitrosamina (BBN) se ha utilizado ampliamente en roedores como una herramienta experimental invaluable para la investigación del cáncer de vejiga (BCA). Se informó que el nivel urinario de su metabolito, N-butil-N-(3-carboxipropil) nitrosamina (BCPN), era un parámetro predictivo muy confiable del BCA. Sin embargo, en la determinación del BCPN urinario, encontramos que el tiempo de retención (tR) del BCPN se amortiguaba aleatoriamente. Los valores de tR del BCPN auténtico a 5, 10, 20, 50 y 100 ppm fueron 28,48, 27,59, 27,43, 28,00 y 28,32 min en comparación con los 28,23 min del BCPN urinario en el análisis HPLC, de manera similar, 17,30 min para el urinario y 18,00 min para el BCPN auténtico en el análisis GC/MS. Para interpretar dicha amortiguación, propusimos teóricamente que podría producirse una determinada interacción molecular transitoria sesgada durante la separación cromatográfica, lo que causaría un cierto grado de fluctuación en el tR de las moléculas objetivo. En conclusión, el tiempo de retención de una sustancia química no es un valor definitivo como se considera a menudo en los análisis de HPLC y GC/MS. En realidad, fluctúa dependiendo principalmente de la interacción entre un grupo de moléculas coexistentes, en particular, cuando se opera a concentraciones más altas.