Biología celular y molecular

Abstracto

La expresión de luciferasa es más precisa que la GFP para evaluar la oncogénesis relevante de Mirna en un estudio de imágenes en vivo in vivo.

Antecedentes: La tecnología de imágenes en vivo in vivo permitió evaluar dinámicamente los procesos y la biología de los tumores durante todo el período experimental en función de una señal bioluminiscente de las células tumorales generadas a partir de la expresión de la proteína fluorescente verde (GFP) o del gen de la luciferasa de la luciérnaga. Recientemente, se ha publicado una comparación de tumores transfectados con Luc y GFP para evaluar el mecanismo biológico de los microARN utilizando sistemas modelos idénticos. 

Métodos: Construimos las células SGC-7901 que implican la coexpresión de Luc y GFP mejorada por estabilidad identificada por PCR en tiempo real (qPCR) y microscopio de fluorescencia, las células construidas se inyectaron en ratones desnudos, luego comparamos la eficiencia y precisión de la transfección de GFP y luciferasa para la oncogénesis relevante para miRNA después de 40 días.

Resultados: Construimos con éxito líneas celulares SGC-7901 que coexpresan la luciferasa con estabilidad mejorada y GFP. La expresión de miR-145 de las células SGC-7901 Luc/LV-miR-145 fue mayor que la de Luc/LV-ctrl, y la intensidad de la luciferasa fue consistente con el volumen del tumor y se relacionó negativamente con la expresión de miR-145 en las células SGC-7901 transfectadas con Luc, pero el fenómeno de GFP fue opuesto. Conclusión: Creímos que la luciferasa ofrece claras ventajas sobre la GFP como un reportero de transfección y expresión génica para ayudar a los estudios de oncogénesis relevantes para los miRNAs en estudios de imágenes en vivo.