Bioquímica y fisiología: acceso abierto

Abstracto

Medición del polipéptido pancreático y su variante peptídica en suero y plasma humanos mediante cromatografía líquida de inmunocaptura y espectrometría de masas en tándem. Intervalos de referencia y consideraciones prácticas de ensayo.

Hernando Escobar, Mark M Kushnir, Julie A Ray, Miles A Merrell, Gwen Gomez, Rebecca Fietkau, Alan L Rockwood y Wayne Meikle A

El polipéptido pancreático (PP) es secretado por los islotes pancreáticos después de la ingestión de alimentos. La composición de la comida está asociada con la concentración de PP liberado en la circulación. El PP puede estar elevado en la sangre de pacientes con tumores pancreáticos endocrinos , lo que respalda su uso como biomarcador. Desarrollamos un ensayo de inmunocaptura-cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem (IC-LC-MS/MS) para cuantificar el polipéptido pancreático (PP) y su metabolito, PP3-36, en suero o plasma humano. El PP y el PP3-36 se enriquecieron a partir del suero o plasma mediante inmunopurificación y las muestras se analizaron mediante LC-MS/MS (AB SCIEX 5500) La imprecisión total del método fue inferior al 20%; el LOD y el LOQ para el PP y el PP3-36 fueron 5 pg/ml y 10 pg/ml, respectivamente. Los intervalos de referencia en sujetos sanos fueron <265 pg/ml (en ayunas); y de 20 a 639 pg/mL (posprandial). El análisis de regresión para la comparación con un método RIA comercial mostró una pobre concordancia. Diferentes tipos de comida aumentan los niveles de péptidos de manera diferente; se observó una mayor secreción de PP y PP3-36 después de comidas ricas en proteínas y grasas, o carbohidratos y grasas, en comparación con comidas que contenían solo carbohidratos. No se observó relación entre PP y índice de masa corporal o grasa corporal. En resumen, se desarrolló y validó un método LC-MS/MS directo para la determinación de PP y PP3-36 en suero y plasma. La única forma truncada endógena de PP detectada junto con el PP intacto en muestras de pacientes fue PP3-36. Nuestros datos sugieren una asociación del tipo de comida con la secreción de PP; no se observaron asociaciones entre las concentraciones de PP y el índice de masa corporal o el porcentaje de grasa corporal.