Bioquímica y fisiología: acceso abierto

Abstracto

Parámetros fisiológicos del crecimiento de levaduras clínicas y aislamiento de antígenos específicos

Arzumanyan Vera, Shmeleva Olga, Serdiuk Olga y Michailova Natalia

En la actualidad se conocen 7 géneros de levaduras clínicamente importantes: Candida, Malassezia, Saccharomyces, Cryptococcus, Trichosporon, Geotrichum y Rhodotorula. La mayoría de ellos pueden causar micosis profundas y superficiales, pero algunos están asociados con enfermedades alérgicas . El desarrollo de preparaciones diagnósticas a partir de la levadura Candida se inició hace muchos años y está mejorando constantemente. Recientemente han aparecido kits comerciales con antígenos de la levadura Malassezia. Los métodos conocidos de extracción de antígenos se basan en la ruptura de células de levaduras (mecánica o ultrasónica). Este enfoque, junto con la presencia de determinantes reactivos cruzados, existe en muchos hongos. El objetivo de este trabajo fue desarrollar preparaciones antigénicas específicas de todos los géneros de levadura enumerados. Hemos utilizado las siguientes cepas de levadura de nuestra colección del instituto: Candida albicans ≥ 927, Geotrichum candidum ≥ 1206, Malassezia furfur ≥ 1451, Rhodotorula mucilaginosa ≥ 132, Cryptococcus neoformans ≥ 3465, Trichosporon cutaneum ≥ 18; y Saccharomyces cerevisiae Y-375 (Colección rusa, Pushchino). Las levaduras se cultivaron en medios líquidos definidos hasta el final de la fase de crecimiento exponencial; se calcularon la tasa de crecimiento máxima y el tiempo de duplicación. Después de eso, los cultivos se centrifugaron, los sobrenadantes se liofilizaron y las células se utilizaron para la inmunización de ratones y la extracción de antígenos. Los ratones blancos se inmunizaron con suspensión celular 5 veces con dosis crecientes (intervalo de 1 semana), después de eso se obtuvieron los sueros. Las preparaciones de antígeno ?1 se obtuvieron de las células mediante extracción rápida con solución de dodecil sulfato de sodio; en este caso, las paredes celulares no se rompieron y el extracto consistió en general en proteínas superficiales. Las preparaciones ?2 son sobrenadantes liofilizados (ver arriba). Para estimar la especificidad de la preparación, se realizó un análisis de transferencia de puntos de cada preparación con cada suero de ratón. A partir de este análisis, se demostró que todas las preparaciones ?1 contenían los antígenos específicos, es decir, cada preparación reaccionó en mejor grado con el suero correspondiente. Sin embargo, en cierta medida, todas estas preparaciones estaban contaminadas con proteínas reactivas cruzadas (manchas con otros sueros). Además, el preparado de Malassezia furfur reaccionó con los sueros de control, tal vez porque esta levadura reside en la piel sana de los animales. Al mismo tiempo, los preparados 2 estaban libres de proteínas con reactividad cruzada , excepto el preparado de Malassezia furfur: ningún suero, incluido el suero de control (ratón puro), reaccionó con este preparado. Podemos llegar a la conclusión de que en el caso de Malassezia se debe realizar una purificación especial del líquido de cultivo, pero en el caso de otras levaduras, los sobrenadantes de cultivo libres de células son preferibles para crear kits de diagnóstico de antígenos.